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在哺乳动物细胞活力与浓度的自动化检测中，Chemometec 公司的 NucleoCounter® NC-200™细胞计数仪是常用工具，而耗材的规范选择与使用直接决定检测结果的准确性。本文将围绕该仪器计数过程中的核心耗材、耗材作用及完整操作流程展开，兼顾专业性与可读性，为科研人员提供清晰指引。

一、核心耗材及作用

在 NucleoCounter® NC-200™的 “活力与细胞计数 - 方法 2 检测"（Viability and Cell Count – Method 2 Assay）中，涉及三类关键耗材，各自承担不可替代的角色：

痴颈补1-颁补蝉蝉别迟迟别&迟谤补诲别;（细胞计数卡）

这是检测的核心载体耗材，主要作用是装载细胞悬液并配合仪器完成检测。它能与仪器的荧光检测系统适配，让仪器通过计数卡内的样本，精准捕捉 Acridine Orange（AO，吖啶橙）和 DAPI（4',6 - 二脒基 - 2 - 苯基吲哚）的荧光信号，进而区分总细胞与非活细胞，为后续计算提供基础数据。

待检测细胞样本

即需要分析的哺乳动物细胞悬液，是检测的核心对象。需注意，样本需来自生物反应器培养（尤其适用于长期培养且未更换培养基的细胞），其状态（如是否存在 “类细胞小体"）会直接影响检测方法的选择 —— 方法 2 正是为应对长期培养细胞的特殊荧光模式而设计。

辅助调整耗材（生长培养基 / PBS）

这类耗材用于校准细胞浓度，确保样本符合仪器检测要求。当细胞浓度高于 5×10? cells/ml 时，需用生长培养基或 PBS 稀释；当浓度低于 5×10? cells/ml 时，需通过离心收集细胞沉淀，再用生长培养基或 PBS 重悬浓缩，避免因浓度过高导致计数重叠、过低导致结果不准确。

二、细胞计数完整流程

基于上述耗材，NucleoCounter® NC-200™的细胞计数过程可分为 5 个关键步骤，操作简单且自动化程度高：

仪器与程序准备

启动仪器的 NucleoView 软件，在菜单中选择 “Viability and Cell Count – Method 2 Assay"；若需要追溯样本，可在界面中输入对应的 Sample ID（样本编号），便于后续数据管理。

细胞悬液混匀

将装有细胞样本的容器颠倒或轻弹，确保细胞均匀分布 —— 这一步能避免细胞聚集形成 “团块"，防止仪器误将多个细胞计为一个，或漏计聚集在底层的细胞。

痴颈补1-颁补蝉蝉别迟迟别&迟谤补诲别;装载样本

手持细胞计数卡，将其吸头端插入混匀后的细胞悬液中，轻轻按压计数卡的活塞，让样本自然吸入计数卡的检测腔室，完成装载（注意避免吸入气泡，气泡会干扰荧光信号检测）。

启动仪器检测

立即将装载好样本的计数卡放入 NucleoCounter® NC-200™的检测仓内，关闭仓门后按下 “RUN" 键，仪器将自动开始荧光扫描与信号分析。

结果读取与校正

检测约 1 分钟后，仪器界面会直接显示两项核心结果：细胞活力（以百分比表示）和总细胞浓度（单位为 cells/ml）。若检测前已在软件中输入样本的稀释倍数或浓缩体积，仪器会自动计算并显示原始细胞浓度，无需手动换算。

叁、耗材使用与计数的关键注意事项

为进一步确保结果可靠，使用耗材与操作过程中需关注两点核心要求：

若样本中存在较多细胞碎片，且仅需计数 “有核细胞"，不可继续使用方法 2—— 此时应切换至 “Aggregated Cell Assay"（聚集细胞检测），避免仪器将无核碎片误计为细胞；

首、次检测新细胞系时，需验证计数准确性：点击仪器图像界面右下角的 “overlay" 按钮，标记仪器识别的计数细胞，目视检查是否有大量细胞漏计或碎片误计；若发现计数范围（门控）不合适，可通过 “Protocol Adaptation Wizard"（方案适配向导）调整门控，覆盖目标细胞群体（排除碎片和过大杂质）后保存新方案，后续检测可直接使用。

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